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3.加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內層滅菌桶的排氣槽內。再以?xún)蓛蓪ΨQ(chēng)的方式同時(shí)旋緊相對的兩個(gè)螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。

4.用電爐或煤氣加熱，并同時(shí)打開(kāi)排氣閥，使水沸騰以排除鍋內的冷空氣。待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋內的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當鍋內壓力升到所需壓力時(shí)，控制熱源，維持壓力至所需時(shí)間。本實(shí)驗用 1．05kg/cm2，121．3℃，20分鐘滅菌。

5.滅菌所需時(shí)間到后，切斷電源或關(guān)閉煤氣，讓滅菌鍋內溫度自然下降，當壓力表的壓力降至0時(shí)，打開(kāi)排氣閥，旋松螺栓，打開(kāi)蓋子，取出滅菌物品。如果壓力未降到0時(shí)，打開(kāi)排氣閥，就會(huì )因鍋內壓力突然下降，使容器內的培養基由于內外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養基而發(fā)生污染。

 6.將取出的滅菌培養基放入 37℃溫箱培養24小時(shí)，經(jīng)檢查若無(wú)雜菌生長(cháng)，即可待用。